PESQUISA VETERINÁRIA BRASILEIRA

Abstract in English:

ABSTRACT.- Carvalho D., Tejkowski T.M., Jaenish F.R.F., Rodrigues R.O., Brito K.C.T. & Brito B.G. 2017. [Susceptibility of two commercial lineages of broilers in the development of necrotic dermatitis and relationship of iss and iutA genes from Escherichia coli with the experimental reproduction of the disease.] Susceptibilidade de duas linhagens comerciais de frango de corte no desenvolvimento de dermatite necrótica e possível relação dos genes iss e iutA de Escherichia coli com a reprodução experimental da doença. Pesquisa Veterinária Brasileira 37(12):1395-1400. Laboratório de Saúde das Aves e Inovação Tecnológica, Instituto de Pesquisas Veterinárias Desidério Finamor, Fundação Estadual de Pesquisa Agropecuária, Estrada do Conde 6000, Eldorado do Sul, Sans Souci, RS 92990-000, Brazil. E-mail: benitobrito@gmail.com Avian cellulitis is a disease of great importance for the global poultry industry, being mainly related to Escherichia coli. In this study the susceptibility of two lineages of broilers in the development of cellulite was compared to the challenge with different concentrations of E. coli. In addition, it evaluated the relationship of the iss and iutA genes with pathogenicity of E. coli samples from different origins (fecal/clinical cases) in chicks and with the experimental reproduction of disease in 35-day-old broilers. By inoculating broilers (Cobb/Ross) with different levels of challenge (105-108 CFU/mL) of E. coli, no significant differences had been observed between strains for sensitivity to necrotic dermatitis for the same dosage (p≤0.05). Detection of the iss and iutA genes showed that they were only present in samples from clinical cases. Likewise, these strains were considered high pathogenicity for chickens (>80% lethality), leading to the formation of more extensive lesion areas (≥3cm2) at 35 days of birds compared to the samples from fecal origin (p≤0.05). Still, the differences with respect to lesion size were also found among isolates of the same origin (p≤0,05). Thus, the lineage can not be considered a primary factor in the development of necrotic dermatitis in broilers. Furthermore, it is suggested that iss and iutA genes, when present together or separately, could be considered as virulence markers for E. coli strains that cause avian cellulite.

• Dermatitis Escherichia coli virulence genes dermatite celulite aviária frango de corte virulência

Abstract in Portuguese:

RESUMO.- Carvalho D., Tejkowski T.M., Jaenish F.R.F., Rodrigues R.O., Brito K.C.T. & Brito B.G. 2017. [Susceptibility of two commercial lineages of broilers in the development of necrotic dermatitis and relationship of iss and iutA genes from Escherichia coli with the experimental reproduction of the disease.] Susceptibilidade de duas linhagens comerciais de frango de corte no desenvolvimento de dermatite necrótica e possível relação dos genes iss e iutA de Escherichia coli com a reprodução experimental da doença. Pesquisa Veterinária Brasileira 37(12):1395-1400. Laboratório de Saúde das Aves e Inovação Tecnológica, Instituto de Pesquisas Veterinárias Desidério Finamor, Fundação Estadual de Pesquisa Agropecuária, Estrada do Conde 6000, Eldorado do Sul, Sans Souci, RS 92990-000, Brazil. E-mail: benitobrito@gmail.com Celulite aviária é uma enfermidade de grande importância para a avicultura mundial, sendo relacionada principalmente à Escherichia coli (E. coli). Neste estudo foi comparada a susceptibilidade de duas linhagens de aves no desenvolvimento da celulite diante do desafio com diferentes concentrações de E. coli. Além disso, foi avaliada a relação dos genes iss e iutA com a patogenicidade de amostras de E. coli de diferentes origens (fecal/casos clínicos) em pintinhos e com a reprodução experimental da doença em aves de 35 dias de idade. Através da inoculação de frangos de corte (Cobb/Ross) com diferentes níveis de desafio (105 a 108 UFC/mL) de E. coli, não foram observadas diferenças significativas entre as linhagens quanto à sensibilidade à dermatite necrótica para a mesma dosagem (p≤0,05). A detecção dos genes iss e iutA demonstrou que estes estiveram presentes somente nas amostras provenientes de casos clínicos. Da mesma forma, estes isolados foram considerados de alta patogenicidade para pintinhos (>80% letalidade), levando a formação de áreas de lesão mais extensas (≥3cm2) em aves de 35 dias, quando comparado às amostras de origem fecal (p≤0,05). Ainda, as diferenças com relação ao tamanho de lesão foram constatadas também entre os isolados de mesma origem (p≤0,05). Desta forma, a linhagem não pode ser considerada um fator primordial para o desenvolvimento de dermatite necrótica em frangos. Ainda, sugere-se que os genes iss e iutA, quando presentes em conjunto ou isoladamente, poderiam ser considerados marcadores de virulência em cepas de E. coli causadoras de celulite aviária.

Abstract in English:

ABSTRACT.- Carvalho D., Moraes L.B., Chitolina G.Z., Herpich J.I., Osório F.S., Fallavena L.C.B., Moraes H.LS. & Salle C.T.P. 2016. Evaluation of thymic lymphocyte loss of broiler using Digital Analysis of the Lymphoid Depletion System (ADDL). Pesquisa Veterinária Brasileira 36(7):652-656. Centro de Diagnóstico e Pesquisa em Patologia Aviária, Faculdade de Veterinária, Universidade Federal do Rio Grande do Sul, Av. Bento Gonçalves 8824, Porto Alegre, RS 90540-000, Brazil. E-mail: tadsalle@gmail.com The thymus is a lymphoid organ and usually evaluated for the degree of lymphocyte loss with subjective histological techniques. This study aimed to adapt and to apply of the digital analysis of the lymphoid depletion system (ADDL) in the thymus in order to obtain a more accurate analysis. Glucocorticoid was used to induce immunosuppression in 55 broilers at 21 days of age; other 15 broilers were the control group. After euthanasia of the broilers, postmortem examination was made. Both thymic chains were collected and six lobes were selected for histological examination of the degree of lymphocyte depletion (scores 1 to 5) and for submission to all stages of processing by the ADDL system. The artificial constructed neural networks (ANN) obtained 94.03% of correct classifications. In conclusion, it was possible to adopt objective criteria to evaluate thymic lymphoid depletion with the ADDL system.

• Poultry cellular immunity lymphoid depletion imunidade celular depleção linfóide

Abstract in Portuguese:

RESUMO.- Carvalho D., Moraes L.B., Chitolina G.Z., Herpich J.I., Osório F.S., Fallavena L.C.B., Moraes H.LS. & Salle C.T.P. 2016. Evaluation of thymic lymphocyte loss of broiler using Digital Analysis of the Lymphoid Depletion System (ADDL). [Avaliação de perda de linfócitos do timo em frangos usando análise digital do sistema de depleção linfóide (ADDL).] Pesquisa Veterinária Brasileira 36(7):652-656. Centro de Diagnóstico e Pesquisa em Patologia Aviária, Faculdade de Veterinária, Universidade Federal do Rio Grande do Sul, Av. Bento Gonçalves 8824, Porto Alegre, RS 90540-000, Brazil. E-mail: tadsalle@gmail.com O timo é um órgão linfóide, que é normalmente avaliado para o grau de perda de linfócitos a partir de técnicas histológicas subjetivas. Este trabalho teve como objetivo a adaptação e aplicação do sistema de análise digital de depleção linfóide (ADDL) para o timo, a fim de tornar sua análise mais acurada. Glicocorticóides foram utilizados a fim de induzir imunossupressão em 55 aves de 21 dias de idade. Outras 15 aves formaram o grupo controle. Posteriormente, para cada um dos aves, realizou-se a eutanásia e necropsia. Ambas as cadeias do timo foram coletadas e foram selecionadas seis lóbulos para processamento histológico, análise quanto ao grau de depleção linfocitária (escores de 1-5) e submissão a todas as fases do processamento pelo sistema ADDL. Observou-se que a rede neural artificial (RNA) construída obteve 94,03% de classificações corretas. Em conclusão, foi possível adotar critérios objetivos para avaliar a depleção linfóide tímica utilizando o sistema ADDL.

Abstract in English:

ABSTRACT.- Kunert-Filho H.C., Cibulski S.P., Finkler F., Grassotti T.T., Jaenisch F.R.F., Brito K.C.T., Carvalho D., Lovato M. & Brito B.G. 2016. First phylogenetic analysis of Avipoxvirus (APV) in Brazil. Pesquisa Veterinária Brasileira 36(5):357-362. Laboratório de Saúde das Aves e Inovação Tecnológica, Instituto de Pesquisas Veterinárias Desidério Finamor, FEPAGRO Saúde Animal, Estrada do Conde 6000, Eldorado do Sul, RS 92990-000, Brazil. E-mail: hiran_veterinario@hotmail.com This study represents the first phylogenetic analysis of avian poxvirus recovered from turkeys in Brazil. The clinical disorders related to fowlpox herein described occurred in a turkey housing system. The birds displaying characteristic pox lesions which were observed on the neck, eyelids and beak of the turkeys. Four affected turkeys were randomly chosen, euthanized and necropsied. Tissues samples were submitted for histopathological analysis and total DNA was further extracted, amplified by conventional PCR, sequenced and phylogenetically analyzed. Avian poxviruses specific PCR was performed based on P4b core protein gene sequence. The histological analysis revealed dermal inflammatory process, granulation tissue, hyperplasia of epithelial cells and inclusion bodies. The P4b gene was detected in all samples. Sequencing revealed a 100% nucleotide and amino acid sequence identity among the samples, and the sequences were deposited in GenBank®. The four Avian poxviruses fragments sequenced in this study clustered along the A1 clade of avipoxviruses, and were classified as Avipoxvirus (APV). Additional studies, such as virus isolation, PCR and sequencing includinga large number of specimens from the Brazilian turkey production must be conducted due to the hazardous risk that poxvirus infections may cause to the Brazilian poultry production scenario, given that Brazil’s turkey production attracts attention due to its economic importance worldwide. Our findings point to the need to identify the prevalence of APV in Brazilian turkey production, to perform risk assessment studies and continued surveillance of APV infections in both wild and commercial avian species.

• Poxviridae Avipoxvirus phylogenetic analysis análise filogenética

Abstract in Portuguese:

RESUMO.- Kunert-Filho H.C., Cibulski S.P., Finkler F., Grassotti T.T., Jaenisch F.R.F., Brito K.C.T., Carvalho D., Lovato M. & Brito B.G. 2016. First phylogenetic analysis of Avipoxvirus (APV) in Brazil. [Primeira análise filogenética de Avipoxvirus (APV) no Brasil.] Pesquisa Veterinária Brasileira 36(5):357-362. Laboratório de Saúde das Aves e Inovação Tecnológica, Instituto de Pesquisas Veterinárias Desidério Finamor, FEPAGRO Saúde Animal, Estrada do Conde 6000, Eldorado do Sul, RS 92990-000, Brazil. E-mail: hiran_veterinario@hotmail.com Este trabalho representa a primeira análise filogenética de Poxvirus aviário detectado em perus no Brasil. Os distúrbios clínicos relacionados com bouba aviária aqui descritos ocorreram em um sistema de alojamento de perus. As aves apresentaram lesões características de varíola observadas no pescoço, pálpebras e bico das aves. Quatro perus com sinais característicos foram escolhidos aleatoriamente, sacrificados e submetidos à autópsia. Amostras de tecido foram submetidas à análise histopatológica e o DNA total foi extraído, amplificado por PCR convencional e os amplicons foram sequenciados e analisados ​​filogeneticamente. A PCR específica para Poxvírus aviário foi realizada com base na seqüência do gene da proteína do núcleo P4b. A análise histológica revelou um processo inflamatório dérmico, tecido de granulação, hiperplasia de células epiteliais e corpúsculos de inclusão. O gene P4b foi detectado em todas as amostras. O sequenciamento revelou uma identidade entre nucleotídeos e aminoácido de 100% entre as amostras e as sequências foram depositadas no GenBank®. Os quatro fragmentos de poxvírus aviário sequenciado neste estudo foram agrupados no clado A1 de avipoxvirus e foram classificados como Avipoxvirus (APV). Estudos adicionais, como isolamento viral, PCR e sequenciamento, incluindo um grande número de perus da produção brasileira devem ser conduzidos devido ao grave risco que a infecção por poxvírus pode causar ao cenário de produção avícola brasileira, tendo em vista que a produção brasileira de perus atrai atenção devido a sua importância mundial. Nossos resultados apontam para a necessidade de identificar a prevalência da APV na produção de peru no Brasil, para realizar estudos de avaliação de risco e continuada monitoração de infecções por APV nas espécies de aves comerciais e silvestres.

Abstract in English:

ABSTRACT.- Salle C.T.P., Moraes L.B., Zimermann F.C., Fallavena L.C.B., Osório F.S., Salle F.O., Carvalho D. & Moraes H.L.S. 2014. Evaluation of bursal lymphoid depletion: comparison between the conventional histology method and digital lymphocyte depletion evaluation system. Pesquisa Veterinária Brasileira 34(Supl.1):7-10. Instituto de Pesquisa Veterinária Desidério Finamor, Fundação Estadual de Pesquisa Agropecuária, Estrada Municipal do Conde 6000, Eldorado do Sul, RS 92990-000, Brazil. E-mail:lucasbmoraes@gmail.com Fifty-five bursa of Fabricius (BF) were evaluated by optical microscopy for three different avian histopathologists (H1, H3 and H4) to determine the degree of lymphoid depletion. One histologist evaluated the same slides at two different times (H1 and H2) with four-months interval between the observations. The same BFs were evaluated using the system of Digital Lymphocyte Depletion Evaluation (ADDL), being performed by three differents operators of the system, not histopathologists. The results showed was a significant difference between the histopathologists and between the scores established by the same expert (H1 and H2). However, there were not significant differences between the scores with the ADDL system, obtained using ADDL. The results make clear the fragility of the subjective lymphocyte depletion score classification by the traditional histologic method, while the ADDL system proves to be more appropriated for the assessment of the lymphoid loss in the BF.

• Bursal lymphoid depletion lymphocyte depletion bursa depleção linfóide bursal depleção linfocitária

Abstract in Portuguese:

RESUMO.- Salle C.T.P., Moraes L.B., Zimermann F.C., Fallavena L.C.B., Osório F.S., Salle F.O., Carvalho D. & Moraes H.L.S. 2014. Evaluation of bursal lymphoid depletion: comparison between the conventional histology method and digital lymphocyte depletion evaluation system. [Avaliação da depleção linfóide bursal: comparação entre a histologia convencional e o sistema de avaliação digital da depleção linfocitária.] Pesquisa Veterinária Brasileira 34(Supl.1):7-10. Instituto de Pesquisa Veterinária Desidério Finamor, Fundação Estadual de Pesquisa Agropecuária, Estrada Municipal do Conde 6000, Eldorado do Sul, RS 92990-000, Brazil. E-mail:lucasbmoraes@gmail.com Cinquenta e cinco bursas de Fabricius (BF) foram avaliadas através da microscopia óptica por três diferentes histopatologistas aviários (H1, H3 e H4) para determinar o grau de depleção linfóide. Um histopatologista avaliou as amostras em dois momentos distintos (H1 e H2) com quatro meses de intervalo entre as observações. As mesmas BF foram avaliadas utilizando-se o sistema de Avaliação Digital da Depleção Linfocitária (ADDL), sendo realizadas por três diferentes operadores do sistema, não histopatologistas. Os resultados mostraram diferenças significativas entre os histopatologistas e entre um mesmo histopatologista (H1 e H2). Contudo, não houve diferenças significativas entre os escores obtidos utilizando-se ADDL. Estes resultados caracterizam a fragilidade da classificação subjetiva em escores de depleção linfóide, enquanto o sistema ADDL prova ser um sistema robusto de avaliação da perda linfocitária na BF.

Abstract in English:

ABSTRACT.- Carvalho D., Oliveira T.M.F.S., Baldani C.D. & Machado R.Z. 2009. An enzyme-linked immunosorbent assay (ELISA) for the detection of IgM antibodies against Leishmania chagasi in dogs. Pesquisa Veterinária Brasileira 29(2):120-124. Departamento de Patologia Veterinária, Universidade Estadual Paulista, Faculdade de Ciências Agrárias e Veterinárias, Via de Acesso Prof. Paulo Donato Castellane s/n, Jaboticabal, SP 14870-000, Brazil. E-mail: zacarias@fcav.unesp.br Visceral leishmaniasis is an emergent zoonosis with an increasing number of new cases in Brazil where the domestic dog is an important parasite reservoir in the infectious cycle of Leishmania chagasi. An enzyme-linked immunosorbent assay (ELISA), based upon the use of a total soluble antigenic preparation of L. chagasi, was adapted for the detection of IgM antibodies in the serum of infected dogs. Optimal dilutions of the antigen, using positive and negative reference sera, were determined by checkboard titrations. The specificity and sensitivity of the ELISA were 100 %. A total of 110 serum samples were taken from dogs in Belo Horizonte, Minas Gerais, Brazil, and examined for anti-L. chagasi IgM antibody by ELISA and indirect fluorescent antibody test (IFAT). About 25% (n=27) of all the dogs tested were found serologically positive for L. chagasi by IFAT, while 89.09% (n=98) were seropositive by ELISA. The results obtained by ELISA and IFAT were significantly different (P<0.01). The combined use of ELISA and IFAT is recommended in order to enable veterinary services to more efficiently detect canine visceral leishmaniasis.

• Leishmania chagasi diagnosis dogs IgM enzyme-linked immunosorbent assay

Abstract in Portuguese:

ABSTRACT.- Carvalho D., Oliveira T.M.F.S., Baldani C.D. & Machado R.Z. 2009. An enzyme-linked immunosorbent assay (ELISA) for the detection of IgM antibodies against Leishmania chagasi in dogs. Pesquisa Veterinária Brasileira 29(2):120-124. Departamento de Patologia Veterinária, Universidade Estadual Paulista, Faculdade de Ciências Agrárias e Veterinárias, Via de Acesso Prof. Paulo Donato Castellane s/n, Jaboticabal, SP 14870-000, Brazil. E-mail: zacarias@fcav.unesp.br Visceral leishmaniasis is an emergent zoonosis with an increasing number of new cases in Brazil where the domestic dog is an important parasite reservoir in the infectious cycle of Leishmania chagasi. An enzyme-linked immunosorbent assay (ELISA), based upon the use of a total soluble antigenic preparation of L. chagasi, was adapted for the detection of IgM antibodies in the serum of infected dogs. Optimal dilutions of the antigen, using positive and negative reference sera, were determined by checkboard titrations. The specificity and sensitivity of the ELISA were 100 %. A total of 110 serum samples were taken from dogs in Belo Horizonte, Minas Gerais, Brazil, and examined for anti-L. chagasi IgM antibody by ELISA and indirect fluorescent antibody test (IFAT). About 25% (n=27) of all the dogs tested were found serologically positive for L. chagasi by IFAT, while 89.09% (n=98) were seropositive by ELISA. The results obtained by ELISA and IFAT were significantly different (P<0.01). The combined use of ELISA and IFAT is recommended in order to enable veterinary services to more efficiently detect canine visceral leishmaniasis.

Abstract in English:

The macromolecules present in the Boophilus microplus saliva were separated by Electrophoresis on Polyacrylamide Gels and transferred to nitrocellulose paper. Some aspects were studied in both situations. Using Coomassie Brilliant Blue 250R to stain the proteins in the gel, 6 and 11 bands were detected on nondenaturing and denaturing systems respectively. Three glicoprotein and one lipoprotein bands were detected when Beta-mercaptoethanol was used (denaturing system). In this situation, three antigenic bands were observed in nitrocellulose paper after immunoenzymatic procedure when infested bovine or hyperimmune rabbit or mouse sera were used. All of these were glicoproteins.

• Boophilus microplus ticks saliva antigenicity

Abstract in Portuguese:

A saliva (pool) de Boophilus microplus foi submetida a eletroforese em gel de poliacrilamida e logo a seguir procedida a transferência para papel de nitrocelulose, a fim de que a antigenicidade pudesse ser observada. A eletroforese revelou a existência de seis bandas quando em condições de não desnaturação e 11 bandas em condições desnaturantes. Neste último caso, três bandas eram glicoprotefuas e uma lipoprotefua. A revelação imunoenzimática no papel de nitrocelulose evidenciou três bandas quando se usaram soros de bovinos infestados por esse ixodídeo ou soro de coelhos e camundongos imunizados com a citada saliva.

• Boophilus microplus ixodídeos antigenicidade da saliva

Abstract in English:

In order to evaluate the immune response of goats against Corynebacterium pseudotuberculosis, 23 groups, comprising 196 animals, were immunized with several antigenic preparations obtained from the bacteriae, at different time intervals, and using various kinds of adjuvants. The results indicated that the rate of immunoprotection in the immunized animals challenged after 120 days was below 60%. The animals challenged between 8 and 10 months showed protection levels ranging from 44.5 to 22.3%. The lowest rate of incidence of the disease appeared in the anima1s challenged between 30 and 60 days after the last immunization.

• Corynebacterium pseutdotuberculosis C. ovis Caseous lymphadenitis immunoprotection goats

Abstract in Portuguese:

Com o objetivo de observar a imunoproteção desenvolvida em caprinos contra Corynebacterium pseudotuberculosis esses animais foram submetidos a diferentes esquemas de imunização, sendo utilizados inóculos de diferentes preparados antigênicos desta bactéria em intervalos de tempo variados e com diversos adjuvantes. Os resultados revelaram que o percentual de imunoproteção nos animais imunizados e desafiados 180 dias após estava abaixo de 60%. Já os animais desafiados dez meses após a primeira inoculação apresentaram níveis de imunoproteção entre 44,5 e 22,3%. O menor índice da doença foi observado nos animais desafiados entre 30 e 60 dias após a última inoculação do preparado antigênico.

• Corynebacterium pseutdotuberculosis C. ovis linfadenite caseosa imunoproteção caprinos